.RU

Анализ патологических форм эритроцитов крови судака




Анализ патологических форм эритроцитов крови судака (Stizostedion lucioperca) Волго-Каспийского канала

Кузина Т.В.

ФГУП «Каспийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства» Россия. Г. Астрахань, улица Савушкина, 1,

tatuls@mail.ru Кузина Т.В. 414026 г.Астрахань, улица Димитрова 5/3, кв.22


Введение

Микроядерное тестирование - один из эффективных методов, позволяющих определить суммарное воздействие токсикантов на структуру хромосом и выявить генетические изменения у конкретной особи [5,6]. Хроническое воздействие неблагоприятных факторов на организм приводит к нарушению цитогенетической стабильности и накоплению хромосомных аномалий в клетках организма [6]. Кроветворная система рыб чутко реагирует на изменение факторов водной среды. При патологических состояниях в крови рыб регистрируются морфологически измененные клеточные элементы, клетки с различной степенью деструкции [1].

^ Цель исследования: оценка степени патоморфологических изменений эритроцитов крови судака, а также цитогенетических нарушений в красных кровяных клетках методом микроядерного тестирования.

^ Материал и методы исследования

Исследования выполнены на репрезентативных выборках эритроцитов периферической крови тестовых объектов: судака Stizostedion lucioperca. Судак чувствителен к кислороду, плохо переносит загрязнение вод токсикантами, и поэтому используется в качестве биоиндикатора загрязнения вод во многих работах. Вылов рыбы для анализа производился весной и осенью 2008 г. на тоневом участке Волго-Каспийского канала. Исследуемые особи судака не имели видимых внешних повреждений и проявлений каких-либо заболеваний. Препараты периферической крови готовили в момент вылова рыб, фиксировали 960 этанолом. Препараты окрашивали по Романовскому-Гимза. На препаратах проводился учет эритроцитов с микроядрами и другими фенотипическими нарушениями ядра. Патологические изменения форменных элементов крови (ФЭК) рыб определяли согласно рекомендациям [2]. Долю клеток с микроядрами (МЯ) и другими типами патологии ядра определяли по отношению к общему количеству проанализированных эритроцитов. Количество исследованных рыб по всем вариантам составило 25 особей. Математическая оценка результатов проводилась с помощью метода альтернативного анализа и критерия Стьюдента.

^ Результаты исследования

При исследовании периферической крови рыб, был обнаружен ряд изменений клеток красного ряда, отличающихся степенью проявления патоморфологических нарушений (табл. 1).

Таблица 1. Сезонные изменения частоты встречаемости морфологических нарушений в эритроцитах судака, %


Отмеченные нарушения

эритроцитов

Сезон 2008 г.

лето

осень

Анизоцитоз

микро -

макро -


92,0

40,0


84,0

40,0

Пойкилоцитоз (полигональность)

88,0

72,0

Агглютинация

68,0

8,0

Изменение цитоплазматической мембраны

72,0

52,0

Смещение ядер к периферии

60,0

28,0

Пикноз

68,0

52,0

Кариорексис

76,0

56,0

Инвагинация ядра

76,0

48,0

Разрушение клетки

76,0

36,0

Ядра-тени

100,0

52,0

Хроматинолиз

16,0

8,0

Ядра-кольца

56,0

28,0

Протуберанцы

16,0

16,0

Ареол

24,0

36,0

Вакуолизация цитоплазмы

48,0

4,0

Кариолиз

44,0

12,0

Олигохромазия

32,0

-

Количество исследованных рыб

25

25

Размер клеток красной крови одного возраста у 92,0 % рыб летом и 84,0 % осенью находился в пределах физиологической нормы. Наличие микроцитов в периферическом русле не превышало 5,2 % от общего пула красных кровяных телец у отдельных особей и отражало нормальный процесс гемопоэза судака. При этом необходимо отметить снижение, как встречаемости микроцитов, так и интенсивности проявления данного показателя у рыб от лета к осени. Содержание и частота встречаемости макроцитов в крови судака находилось на одном уровне за весь период исследований. В летний период, по сравнению с осенью, у большего количества особей (76,0 %) регистрировали разрушающиеся эритроциты (лизис) на мазках крови.

Пойкилоцитоз эритроцитов у большинства особей (88,0 и 72,0 % весной и осенью соответственно) был выражен, в основном, полигональностью незначительной части клеток (максимально 15,0 % на мазке). Лишь у одной особи пойкилоцитоз охватывал до 72,0 % эритроцитов. Патологические эритроциты с отростками (характерные для угнетения эритропоэза) встречались единично (не более 0,4 % от общего количества клеток) у отдельных особей не зависимо от сезона исследований.

Гемагглютинирующий эффект (без явных признаков деструкции клеток) наблюдали в основном в летний период исследований у 68,0 % рыб. Этот показатель значительно снижался (до 8,0 %) осенью. Подобная тенденция также отмечена при исследовании изменений цитоплазматической мембраны (фестончатообразные клетки). Деструктивные изменения эритроцитов характеризовались деформацией ядер (полиморфизм). Пикноз ядер отмечался более чем у 50,0 % рыб, независимо от сезона. Явление кариорексиса приобретало более выраженный характер у «летнего» судака (76,0 %), как по встречаемости признака, так и по степени его проявления. Такие дегенеративные изменения ядер, как хроматинолиз, кариолиз с явлениями, близкими фрагментозу, встречающиеся у исследованных рыб, также чаще отмечали в летний период, рисунок 1.





а) Хроматинолиз ядра эритроцитов





б) Кариолиз ядра эритроцитов

^ Рисунок 1 Деструктивные изменения эритроцитов, ув. × 1000


Исследование МЯ относится к одному из наиболее важных быстрых тестов выявления мутагенного действия биотических и абиотических факторов на организм рыб (1,8). Показано, что микроядра (МЯ), в основном, образуются в результате неравномерного расхождения хромосом [5,6]. Один из путей формирования МЯ – нарушение процессов деления клеток с отслаиванием целых или фрагментов хромосом (рисунок 2). МЯ могут формироваться при отсутствии деления клеток. Ядро сначала формирует лопасть, которая потом отслаивается и образует МЯ [5]. Выдвинуто предположение, что немитотическое образование МЯ – это путь выброса генетически дефектного хроматина.





^ Рисунок 2 Микроядра в эритроцитах периферической крови судака, ув. ×1000


Проведенный микроядерный анализ клеток периферической крови судака выявил сезонные различия по числу МЯ. Частота встречаемости эритроцитов с микроядрами достоверно выше в летний период исследования (1,81%), что возможно связано с сезонной перестройкой метаболизма у рыб, а также с увеличением выбросов загрязняющих веществ во время весеннего паводка.

Таблица 2. Частота встречаемости микроядер в эритроцитах судака Волго-Каспийского канала, 2008г.


Показатели

Лето

Осень

M±m

Интервал

варьирования, от-до

M±m

Интервал варьирования, от-до

Эритроциты с МЯ

18,12±1,44

7 ÷ 33

10,2±1,04

3 ÷ 26

Кол-во обследованных рыб

25

25

Кол-во проанализированных клеток

25000

25000



^ Примечание: * р< 0,05

Выявлено, что количество клеток с МЯ находятся в обратной корреляционной зависимости (R±mr=-0,58±0,17; р< 0,001 ) от клеток с другими признаками различной степени деструкции ядра, такими как, хроматинолиз (в том числе появление кольцеобразных ядер), кариолиз с явлениями близкими фрагментозу (ареол хроматина вокруг ядра, «протуберанцы» кариоплазмы во внутриклеточное пространство), кариорексис – распад генетического материала ядра хроматина на глыбки, гранулы (рисунок 3).





^ Рисунок 3 Микроядра на фоне других дегенеративных нарушений в ядре эритроцитов периферической крови судака, ув. ×1000

Выявленные патоморфологические изменения клеток красной крови прежде всего отражают неблагоприятную токсикологическую обстановку среды обитания (особенно летом, в период завершения паводка). Снижение частоты встречаемости и интенсивности данных показателей к осени может свидетельствовать о стабилизации токсикологических процессов водной среды Волго-Каспийского канала. У всех исследованных рыб доля молодых форм эритроцитов (от общего количества красных кровяных телец) в среднем составляла 4,0-4,5 %, в отдельных случаях достигая 9,0 %.

Проведенный цитопатологический анализ клеток периферической крови позволил выявить изменения, наиболее значимые для здоровья рыб. Это пойкилоцитоз эритроцитов (полигональность), изменения цитоплазматической мембраны (фестончатообразные клетки), чаще регистрируемые летом. В летний период, по сравнению с осенью, у большего количества особей регистрировали разрушающиеся клетки красной крови (лизис), кариорексис, хроматинолиз, кариолиз ядер эритроцитов. Процент пикнотичных ядер не изменялся по сезонам года. Можно предположить, что характер отмеченных цитоморфофизиологических нарушений связан с присутствием генотоксикантов, обладающих повреждающим действием.


Список литературы

  1. Давыдов О.Н. Патология крови рыб / Давыдов О.Н., Темниханов Ю.Д., Куровская Л.Я. -Фирма «ИНКОС», 2006. - 206 с.: ил..-ISBN 966-8347-37-4.

  2. Житенева Л.Д. Атлас нормальных и патологически измененных клеток крови рыб. Житенева Л.Д., Полтавцева Т.Г., Рудницкая О.А.- Ростов-на-Дону: Кн. изд-во, 1989.-112 с.- ISBN 5-7509-1273-6.

  3. Иванова Н.Т. Атлас клеток крови рыб (сравнительная морфология и классификация форменных элементов крови рыб). /М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983.- 184 с.

  4. Изюмов Ю.Г., Таликина М.Г., Чеботарева Ю.В. Количество микроядер в эритроцитах периферической крови плотвы Rutilus rutilus и леща Abramis brama Рыбинского и Горьковского водохранилищ Изюмов Ю.Г., М.Г. Таликина, Ю.В. Чеботарева // Биология внутренних вод, 2003 - №1, С.98-101.-ISSN 0320-9652.

  5. Ильинских Н.Н. Использование микроядерного теста в скрининге и мониторинге мутагенов / Ильинских Н.Н., Ильинских И.Н., Некрасов В.Н. // Цитология и генетика. 1988. Т. 22. №7. С. 67-72.

  6. Ильинских Н. Н. Микроядерный анализ и цитогенетическая нестабильность / Н. Н. Ильинских, В. В. Новицкий, Н. Н. Ванчугова, И. Н. Ильинских. – Издательство Томского Университета, Томск, 1992. – 270с.

  7. Кошулин Н.А. Рыбы пресных вод Субарктики как биоиндикаторы техногенного загрязнения. / Кошулин Н.А., Лукин А.А., Амонтсен П.А.- Апатиты.- 1999.- 142 с.

  8. Методические указания по гематологическому обследованию рыб в водной токсикологии. / Сост. Крылов О.Н.-Л.: Изд-во ГосНИОРХ, 1974.- 40.с.

  9. Моисеенко Т.И. Гематологические показатели рыб в оценке их токсикозов (на примере сига Coregonus lavaretus) // Вопросы ихтиологии, 1998 №3, с.371-380.-ISSN 0042-8752.

  10. Справочник по физиологии рыб./ Сост. А.А. Яржомбек, В.В. Лиманский, Т.В. Щербина с соавт. Под.ред. А.А. Яржомбека.-М.: Агропромиздат, 1986.- 192 с.

  11. Эколого-гематологические характеристики некоторых видов рыб. Справочник. /Сост. Л.Д. Житенева, О.А. Рудницкая, Т.И. Калюжная. – Ростов-на-Дону: Изд-во «Молот», 1997. – 152с.- ISBN 5-86524-023-4.



7-stupenej-k-radosti-bezopasno-i-s-udovolstviem.html
7-sur-2012-zhil-trsinbek-kkshev-atindai-altindi-orta-mekteb.html
7-svedeniya-o-nauchnom-rukovoditele-otche-t.html
7-svrzani-s-okolnata-sreda-avarii-oplakvaniya-i-vzrazheniya-doplnengodishendoklad-za-izplnenie-na-dejnostite.html
7-szhatie-tonalya-skazka-o-sile.html
7-tara-akshobhya-i-vajrochana-v-tibetskoj-sisteme-meditacii-lama-anagarika-govinda-osnovi-tibetskogomisticizma.html
  • composition.bystrickaya.ru/plan-lekcii-ponyatie-o-sepsise-klassifikaciya-etiologiya-i-patogenez-sepsisa.html
  • studies.bystrickaya.ru/drevnerusskaya-literatura-ix-xii-veka.html
  • thescience.bystrickaya.ru/infografika-graficheskie-formi-predstavleniya-zhurnalistkoj-informacii.html
  • lektsiya.bystrickaya.ru/prilozhenie-1a-proekt-ot-horoshego-k-velikomu-dzhim-kollinz-ot-horoshego-k-velikomu.html
  • essay.bystrickaya.ru/d-e-ertner-teoriya-i-istoriya-izuchaemih-yazikov.html
  • testyi.bystrickaya.ru/45-dopusk-rabotnikov-k-rabotam-v-usloviyah-dejstviya-opasnih-i-vrednih-proizvodstvennih-faktorov.html
  • urok.bystrickaya.ru/prilozhenie-8-kompetencii.html
  • znanie.bystrickaya.ru/bbk-74-262-21-stranica-17.html
  • textbook.bystrickaya.ru/informaciya-o-meropriyatiyah-mezhdunarodnogo-haraktera-v-sfere-kulturi-i-iskusstva-za-2010-god-azerbajdzhan.html
  • knigi.bystrickaya.ru/shet-tln-oitu-metodikasi-ilim-retnde.html
  • college.bystrickaya.ru/-nachalo-poiskov-sokrovennogo-podnyataya-v-knige-tema-schitaetsya-zapretnoj-vi-ne-najdyote-upominaniya-o-nej-v-nauchnih-otchyotah-eyo-obhodit-storonoj-pechat-v-neyo.html
  • books.bystrickaya.ru/byudzhettk-badarlama.html
  • laboratornaya.bystrickaya.ru/rasskazi-yankovskogo-stranica-4.html
  • writing.bystrickaya.ru/charles-dickens-essay-research-paper-charles-dickensin.html
  • control.bystrickaya.ru/deyatelnost-komitetov-i-komissij-gd-gosudarstvennaya-duma-rf-monitoring-smi-2-7-iyunya-2008-g.html
  • zanyatie.bystrickaya.ru/sposobi-aktivizacii-deyatelnosti-shkolnikov-na-urokah-russkogo-yazika.html
  • reading.bystrickaya.ru/levi-k-g-mac-v-d-kusner-yu-s-kirillov-p-g-alakshin-a-m-tolstov-s-v-osipov-e-yu-efimova-i-m-bak-s-postglyacialnaya-tektonika-v-bajkalskom-rifte.html
  • student.bystrickaya.ru/16-tvorcheskij-konkurs-vdohnovenie-programma-17-18-aprelya-2008-g.html
  • testyi.bystrickaya.ru/4-osnovnie-meropriyatiya-informaciya-o-realizacii-plana-meropriyatij-po-provedeniyu-v-2004-godu-v-chuvashskoj-respublike.html
  • student.bystrickaya.ru/216-sistemi-massovogo-obsluzhivaniya-konspekt-lekcij-dlya-studentov-specialnosti-151001-tehnologiya-mash-inostroeniya.html
  • paragraf.bystrickaya.ru/vse-samie-svezhie-podrobnosti-i-programma-na.html
  • laboratornaya.bystrickaya.ru/rabochij-plan-klassifikaciya-reklami-vidi-i-formi-reklami-naibolee-drevnie-formi-reklami-gazetnie-obyavleniya-pervoj-polovini-hush-veka.html
  • college.bystrickaya.ru/23-o-povedenii-i-obshenii-1-audiovizualnaya-kultura-8.html
  • learn.bystrickaya.ru/esi-karinge-omvai-paranu-sauakari-vivoru-i-vsem-ostalnim-moim-druzyam-i-uchitelyam-s-novoj-gvinei-umeyushim-zhit-v-trudnih-prirodnih-usloviyah-stranica-20.html
  • doklad.bystrickaya.ru/viiigosudarstvennij-kontrol-nadzor-tehnicheskij-reglament-o-bezopasnosti-obektov-vnutrennego-vodnogo-transporta.html
  • literature.bystrickaya.ru/bivshie-i-nineshnie-chleni-komiteta-300-dzhon-koleman-komitet-300-tajni-mirovogo-pravitelstva.html
  • thesis.bystrickaya.ru/pravila-ustrojstva-elektroustanovok-v-red-prikaza-minenergo-sssr-ot-01-08-1988-n-376-reshenij-mintopenergo-rf-ot-24-07-1996-stranica-7.html
  • znanie.bystrickaya.ru/analiz-sostoyaniya-finansovogo-rinka-v-tom-chisle-rinka-kollektivnih-investicij-po-itogam-2010-i-1-polugodiya-2011-goda.html
  • abstract.bystrickaya.ru/1-ponyatie-o-kodirovanii-informacii-universalnost-diskretnogo-cifrovogo-predstavleniya-informacii-pozicionnie-i-nepozicionnie-sistemi-schisleniya-algoritmi.html
  • thescience.bystrickaya.ru/intervyu-veteranov-vov-detej-vojni-gruppa-nasha-obshaya-pobeda-vkontakte.html
  • laboratornaya.bystrickaya.ru/prostejshij-kommunalnij-individ-kniga-krizis-kommunizma.html
  • composition.bystrickaya.ru/perechen-pamyatnikov-kulturi-vklyuchaemih-v-spisok-pamyatnikov-kulturi-podlezhashih-ohrane-kak-pamyatniki-gosudarstvennogo-znacheniya-utverzhdennij-postanovleniem-so-stranica-4.html
  • essay.bystrickaya.ru/detstvo-yunosheskie-i-studencheskie-godi.html
  • lektsiya.bystrickaya.ru/probeli-v-prave-i-sposobi-ih-ustraneniya.html
  • abstract.bystrickaya.ru/25-informacionnie-sistemi-rukovoditelya-uchebnoe-posobie-tomsk-2001-udk-681-325-5.html
  • © bystrickaya.ru
    Мобильный рефератник - для мобильных людей.